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1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化妝品中八種水溶性色素櫻桃紅、食品紅17、檸檬黃、桔黃、莧菜紅、胭脂紅、靛藍(lán)、亮藍(lán)的液相色譜測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于皮膚護(hù)理類和眼部修飾類化妝品中水溶性色素的測(cè)定。

2 原理

用水提取化妝品中的水溶性色素，提取液經(jīng)離心過(guò)濾后，用高效液相色譜法進(jìn)行測(cè)定。根據(jù)其保留時(shí)間定性，外標(biāo)法定量。液相色譜-質(zhì)譜法確證。

3 試劑和材料

除非另有說(shuō)明，所用試劑均為分析純，水為二次去離子水或重蒸水。

3.1 甲醇：高效液相色譜級(jí)。

3.2 乙酸銨。

3.3 櫻桃紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.4 食品紅17標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.5 檸檬黃標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.6 桔黃標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.7 莧菜紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.8 胭脂紅標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.9 亮藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%。

3.10 靛藍(lán)標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)：純度≥97%

3.11 水溶性色素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取適量水溶性色素(*到0.1mg)，以水配制成濃度均為l000μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液。根據(jù)需要用水稀釋成適用濃度的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。冰箱冷藏保存，有效期1個(gè)月。

3.12 0.45μm水性濾膜。

4 儀器與設(shè)備

4.1 高效液相色譜儀：配有二*管陣列檢測(cè)器。

4.2 微量進(jìn)樣器：10μL。

4.3 超聲波清洗器。

4.4 離心機(jī)：大于5000r/min。

4.5 溶劑過(guò)濾器。

5 測(cè)定步驟

5.1 試樣處理

5.1.1 液體樣品

稱取化妝品試樣約1g(*到0.001g)，置于50mL具塞錐形瓶中，加入15mL水，在超聲波清洗器中超聲提取20min，提取液移入25mL容量瓶中，用水稀釋至刻度，混勻，經(jīng)濾膜(3.12)過(guò)濾，所得濾

液供液相色譜測(cè)定

5.1.2 固體樣品

稱取化妝品試樣約1g（*到0.001g），置于50mL具塞錐形瓶中，加入15mL水，3g氯化鈉固體，在超聲波清洗器中超聲提取20min，提取液過(guò)濾，用水定容至25mL，經(jīng)濾膜（3.12）過(guò)濾，所得濾液供液相色譜測(cè)定。

2 測(cè)定

5.2.1 色譜條件

a）色譜柱： Kromasil c18 250mm×4.6mm（內(nèi)徑），5μm（粒徑），或相當(dāng)者；

b）流動(dòng)相A：甲醇；

c）流動(dòng)相B：0.005mol/L乙酸銨；

d）流動(dòng)相梯度（見(jiàn)表1）；

e）流速：1.0mL/min；

f）檢測(cè)波長(zhǎng)：櫻桃紅、食品紅17、檸檬黃、桔黃、莧菜紅、胭脂紅、靛藍(lán)：254nm；亮藍(lán)：63nm；

g）柱溫：室溫；

h）進(jìn)樣量：10μL。

5.2.2 標(biāo)準(zhǔn)工作曲線繪制

用水溶性色素標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液（3.11）分別配制成濃度為0.5mg/L、1.0mg/L、5.0mg/L、10.0mg/L、20.0mg/L、50.0mg/L、100.0mg/L的混合標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，分別取10μL注入液相色譜儀，按色譜條件（5.2.1）進(jìn)行測(cè)定，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)，與其對(duì)應(yīng)的濃度為橫坐標(biāo)作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)工作曲線。在上述儀器條件下（5.2.1）檸檬黃的保留時(shí)間約為4.4min，莧菜紅的保留時(shí)間約為5.lmi，靛藍(lán)的保留時(shí)間約為5.9min，胭脂紅的保留時(shí)間約為6.2min，桔黃的保留時(shí)間約為6.6min，食品紅17的保留時(shí)間約為6.9min，亮藍(lán)的保留時(shí)間約為7.3min，櫻桃紅的保留時(shí)間約為8.4min，水溶性色素標(biāo)準(zhǔn)物種類表和色譜圖參見(jiàn)附錄A、附錄B。

5.2.3 試樣測(cè)定

用微量進(jìn)樣器準(zhǔn)確吸取10μL試樣溶液（5.1）注入液相色譜儀，按色譜條件（5.2.1）進(jìn)行測(cè)定，記錄色譜峰的保留時(shí)間和峰面積。待測(cè)物質(zhì)含量髙，樣液超過(guò)線性范圍的，可用水稀釋后進(jìn)行測(cè)定。需要時(shí)，用液相色譜-質(zhì)譜法進(jìn)行確證（參見(jiàn)附錄C）

5.3 空白試驗(yàn)

除不稱取試樣外，均按上述步驟進(jìn)行。

6 結(jié)果計(jì)算

結(jié)果按式（1）計(jì)算：

X=（c×V）/m*1000 （1）

式中：

X——化妝品中待測(cè)物質(zhì)的量，單位為毫克每千克（mg/kg）；

c——從標(biāo)準(zhǔn)工作曲線上查出的試樣溶液中水溶性色素的濃度，單位為毫克每升（mg/L）；

V——試樣定容體積，單位為升（L）；

m——試樣的質(zhì)量，單位為克（g）。

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